بادئ ذي بدء ، يترك كل من EcoR1 و Xba1 مسافة 5 بوصات عند هضم الحمض النووي (كما يفعل Nde1). في كلتا الحالتين يتم تجويف الطرف 3 وهذا هو السبب في أن مادة البوليرميز يمكن أن تضيف قواعد. ثانيًا ، لا يمكن لجميع البوليميرات سوى إضافة قواعد إلى النهاية 3 ، لذا فإنKlenow سيضيف 4 قواعد إلى نهاية 3 المتراجعة لكلا الموقعينلإنشاء نهايات حادة.
هل تترك الإنزيمات المقيدة 5 فوسفات؟
تحتوي النواقل والإدخالات المهضومة بواسطة إنزيمات التقييد على التعديلات الطرفية الضرورية (5 'فوسفات و 3' هيدروكسيل) ، بينما الأجزاء التي تم إنشاؤها بواسطة تفاعل البوليميراز التسلسلي (PCR) قد لا.
هل يمكن ربط النهايات الحادة؟
ربط نهاية حادة
لا يتضمن ربط نهاية بلانت اقترانًا أساسيًا للنهايات البارزة ، لذلكقد يتم ربط أي نهاية حادة بنهاية حادة أخرى. قد تتولد النهايات الحادة بواسطة إنزيمات تقييدية مثل SmaI و EcoRV.
هل ينتج طق بوليميراز نهايات حادة؟
Yes … يضيف Taq Polymerase A-Overhangs إذا حافظت على خطوة التمديد النهائية عند 72 dC على PCR. تستخدم في الغالب لاستنساخ TA.
لماذا نستخدم جزء Klenow في تسلسل الحمض النووي؟
جزء Klenow مفيد للغاية للمهام القائمة على البحث مثل: توليف الحمض النووي مزدوج الشريطة من القوالب المفردة.ملء في 3 نهايات منحسر لشظايا الحمض النووي لجعل 5 'متدلية حادة .هضم جاحظ 3 'نتوءات.
