بمجرد ظهور الخلايا منفصلة ، أضف مجلدين من وسائط النمو الكاملة المُسبَّبة مسبقًالتعطيل التربسين. قم بتفريق الوسط برفق عن طريق التنصت على سطح طبقة الخلية عدة مرات لضمان استعادة >95٪ من الخلايا.
كيف أتوقف عن نشاط التربسين؟
يمكن إيقاف هضم التربسين عن طريقالتجميدأو عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للتفاعل إلى ما دون الرقم الهيدروجيني 4 عن طريق إضافة حمض الفورميك أو الخليك أو ثلاثي فلورو أسيتيك (سيستعيد التربسين نشاطه عندما يتم رفع الرقم الهيدروجيني فوق الرقم الهيدروجيني 4). يمكن تخزين العينات المهضومة عند -20 درجة مئوية
ما الذي يحيد التربسين؟
المخزن المؤقتالذي يحتوي على أيونات الكالسيوم والمغنيسيومسيبطئ أيضًا نشاط التربسين. ومع ذلك ، فإن FBS هي الطريقة الأكثر فعالية لتثبيط نشاط التربسين.
هل المصل يعطل التربسين؟
المصل يعطل التربسين المتبقي المتبقيمن الهضم الإنزيمي للكلى والإنزيمات المحللة للبروتين التي يتم تصنيعها لاحقًا بواسطة الخلايا. يمكن أن تنمو الخلايا التي تم تجريبها حديثًا إلى طبقات أحادية في حالة عدم وجود مصل بشرط غسلها مرارًا وتكرارًا لإزالة التربسين المتبقية.
ما مقدار الوسائط التي يستغرقها إلغاء تنشيط التربسين؟
طالما أنك تستخدمعلى الأقل نسبة 1: 1 من 5-10٪ سيروم- يحتوي على وسيط مع التربسين الخاص بك يجب أن يكون هناك أكثر من تثبيط كافٍ ، متبوعًا بالطرد المركزي ومتوسط التبادل مع وسط جديد.
