القطع الأثرية باهتة التمهيدي تحدث عادةً عندرقم دورة عتبة كبير (عادةً > 35 دورة)، وهو أعلى من رقم دورة العتبة لـ amplicon المطلوب. تزداد ثنائيات التمهيدي بشكل ملحوظ عند إضافة الحمض النووي الجيني غير المتجانسة.
أين ترى ثنائيات البرايمر على هلام الحمض النووي؟
في نقطة النهاية غير الكمية PCR ، سيظهر dimer التمهيدي على شكل مسحة باهتة إلى حد ما على هلام agarose ،أسفل نطاق المنتج محل الاهتمام.
كيف يتم تشكيل ثنائيات البرايمر؟
شكل ثنائيات التمهيديعندما يرتبط اثنان من البادئات ببعضهما، بدلاً من القالب DNA ، بسبب مناطق التكامل التمهيدي.
كيف تكتشف ثنائيات البرايمر؟
أسهل طريقة للتحقق من وجود ثنائيات التمهيدي هيلمقارنة ردود أفعالك بالتحكم السلبي (الماء بدلاً من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي). سيستمر تشكيل ثنائيات التمهيدي في التحكم السلبي. من المرجح أن تشكل بعض مجموعات البرايمر ثنائيات أكثر من غيرها.
لماذا تظهر ثنائيات البرايمر؟
يتم رؤية ثنائيات التمهيدي في الغالببسبب التركيز العالي من التمهيدي في خليط تفاعل PCR. أو إذا لم يكن هناك تضخيم في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ويمكنك أن ترى على ثنائي التمهيدي في هلام الاغاروز. إذا كنت قادرًا على رؤية منتج PCR ، فيمكنك تقليل تركيز الأولية والحفاظ على الشروط الأخرى كما هي.
